NEFROLOGÍA. Vol. XXIV. Número 5. 2004 COMUNICACIÓN BREVE Expresión vascular de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) en la hipertensión arterial esencial P. Gómez-Fernández, V. Sánchez-Margalet*, A. Ruiz**, F. García-Molina***, J. Medina*** y M. Almaraz Unidad de HTA. Sección de Nefrología. Hospital del SAS. Jerez. *Servicio de Bioquímica. Hospital del SAS, Virgen Macarena. Sevilla. **Servicio de Análisis Clínicos ***Servicio de Cirugía. Hospital del SAS. Jerez. INTRODUCCIÓN El óxido nítrico (ON) procede de la oxidación de la L-arginina por la acción de la óxido nítrico sintasa (NOS). Dos de las isoformas de esta enzima, neuronal (nNOS) y endotelial (eNOS), se expresan constantemente en diversos tejidos. La NOS inducible (iNOS) se expresa en varios tipos de células en respuesta a diferentes estímulos 1, 2. La abundancia del ON depende del balance entre su producción y su destrucción. Las especies reactivas de oxígeno (ROS), reaccionando con el ON, pueden disminuir su bioactividad 3, 4. El ON participa en múltiples mecanismos que intervienen en la génesis y mantenimiento de la hipertensión arterial (HTA) 2. En un estudio previo comprobamos que en la HTA esencial sal sensible existe una incapacidad para aumentar la excreción urinaria de metabolitos de ON tras la ingesta de sodio 5. Con el objetivo de estudiar la participación de la síntesis de ON en la HTA, en este trabajo determinamos la expresión de la eNOS en la arteria cística de sujetos con HTA esencial. MATERIAL Y MÉTODOS Estudiamos 11 sujetos (9 mujeres, 2 hombres), de una edad de 55 ± 3 años, diagnosticados de HTA Recibido: 16-I-2004. En versión definitiva: 31-V-2004. Aceptado: 31-V-2004. Correspondencia: Dr. Pablo Gómez Fernández Servicio de Nefrología Hospital General del SAS Ctra. Circunvalación, s/n 11407 Jerez (Cádiz) esencial. Ninguno tenía diabetes mellitus ni otras enfermedades sistémicas. Todos recibían terapia antihipertensiva con diuréticos (8 enfermos) y/o betabloqueantes (3 enfermos). No recibían ningún otro tipo de medicación. No se incluyeron enfermos en terapia con calcioantagonistas, bloqueantes del sistema renina-angiotensina ni inhibidores de la HMGCoA reductasa. Todas las mujeres eran postmenopáusicas. Ningún enfermo fumaba desde al menos 1 año antes. Los enfermos eran ingresados para colecistectomía laparoscópica programada por colelitiasis. El día del ingreso se extraía sangre para determinaciones analíticas. Durante la intervención se tomaba una muestra de la arteria cística que era mantenida en nitrógeno líquido hasta su procesamiento. Como grupo control se estudiaron 16 sujetos normotensos, de una edad de 50 ± 0,9 años, 12 mujeres postmenopáusicas y 4 hombres, no fumadores sometidos a colecistectomía laparoscópica por colelitiasis que no recibían ningún tipo de medicación. Todos los sujetos fueron sometidos a la misma técnica anestésica. Para la determinación de la expresión de la NOS, tras la homogenización de la muestra se centrifuga y se determina la concentración de proteínas. Tras separación electroforética, las proteínas se electrotransfieren a una membrana de nitrocelulosa La membrana se bloquea con leche descremada y se incuba con el anticuerpo monoclonal específico para cada isoforma de NOS (Transducción laboratorios, BD Biosciencies, San José, CA, USA). Tras lavar la membrana se incuba con un anticuerpo secundario marcado con peroxidasa. Finalmente se incuba con un sustrato quimioluminiscente y se expone una película radiográfica. Las bandas se escanean y se analizan las densidades ópticas por el programa PCBAS. Para el análisis estadístico se uso el Mann Witney para las diferencias entre las variables cuantitavas, y el Chi cuadrado para las cualitativas. La relación entre las variables se hizo por regresión simple y se 486 eNOS EN HIPERTENSIÓN ESENCIAL usó el análisis de la covarianza para ajustes a variables no controladas. Los resultados se expresan como X ± ES. Valores de p < 0,05 se consideraron significativos. RESULTADOS No existieron diferencias en la edad , sexo ni índice de masa corporal entre los dos grupos. Los valores de presión arterial sistólica (PAS) y diastólica (PAD) y los parámetros analíticos se expresan en la tabla I. Los valores de ácido úrico, colesterol y triglicéridos fueron significativamente más elevados en el grupo con HTA. No existieron diferencias significativas en la expresión de la nNOS (594 ± 7 vs 597 ± 12). La expresión vascular de la eNOS fue, sin embargo, más baja en el grupo con HTA (337 ± 15 vs 409 ± 5 u, p < 0,01) (fig. 1). Se objetivó una correlación inversa entre la expresión de eNOS y los niveles de triglicéridos (r: ­627, p < 0,01). Tras el ajuste a la trigliceridemia, persistieron las diferencias de la eNOS entre los dos grupos. No existió correlación entre los valores eNOS y los de la presión arterial y otros parámetros bioquímicos. DISCUSIÓN El ON ejerce múltiples efectos vasculoprotectores. Además de ser un agente antiateroscleroso, por sus acciones vasodilatadores y natriuréticas interviene en el control de la PA 1, 2. En la HTA hay disfunción endotelial y, como ocurre en animales de experimentación, los sujetos con HTA sal sensible pueden tener una disminución de la bioactividad de ON 5, 6. La disminución de la biodisponibilidad del ON puede ser el resultado de una menor producción, Fig. 1.--Ejemplos (inmunoblot) representativos de eNOS en sujetos control e hipertensos. Tabla I. HTA (n: 11) IMC (k/m2) PAS PAD Hb (g/dl) Creatinina (mg/dl) Ácido úrico (mg/dl) Colesterol (mg/dl) Triglicéridos (mg/dl) eNOS (u) 28 154 94 13,2 1,1 5,9 234 148 330 ± ± ± ± ± ± ± ± ± 0,9 2,6 1 0,1 0,05 0,3 6 3,5 12 Control (n: 15) 27 121 73 13 1,0 4,2 206 115 409 ± ± ± ± ± ± ± ± ± 0,9 2,4 2 0,1 0,04 0,2 10 3 5 p ns < 0,001 < 0,001 ns ns < 0,05 < 0,01 < 0,01 < 0,001 IMC: índice de masa corporal; PAS: presión arterial sistólica; PAD: presión arterial diastólica. eNOS: óxido nítrico sintasa endotelial. de un aumento de su degradación o de ambos mecanismos. En la HTA puede haber un elevado estrés oxidativo 3, 4. El anión superóxido resultante puede reaccionar con el ON, inactivándolo. En el presente trabajo, comprobamos que una menor expresión de la eNOS también podría participar en la disminución de síntesis de ON en la HTA esencial. Dado que pueden existir diferencias en la expresión de la eNOS en los diversos territorios vasculares 7, es posible que los hallazgos de la arteria cística no reflejen exactamente lo que ocurre a nivel sistémico. Se ha elegido esta arteria por la facilidad de obtención al aprovechar la cirugía programada. Por otra parte, los grupos estudiados tenían las mismas características (edad, sexo, índice de masa corporal y tabaquismo). Por ello consideramos que el análisis de los hallazgos de la arteria cística permite una comparación objetiva. No está clara la causa de una disminución de la expresión de la eNOS en la HTA esencial. Teóricamente, podría ser debido a mecanismos pretranscripcionales, postranscripcionales o ambos. Diversas citocinas proinflamatorias como el factor de transcripción nuclear (TNF) pueden disminuir la estabilidad de mRNA de la eNOS 8. También las lipoproteínas de baja densidad oxidadas (LDL-ox) ejercen una retroregulación negativa de la eNOS a nivel postranscripcional 9. En la HTA pueden existir niveles elevados de citocinas y de LDL-ox 10, 11. En nuestro estudio existieron diferencias en diversos parámetros metabólicos lipídicos entre los sujetos hipertensos y el grupo control Se objetivó una correlación negativa entre eNOS y triglicéridos. La diferencia de eNOS entre los grupos, sin embargo, persistió tras ajuste a los niveles de triglicéridos. Deben existir otros factores no definidos que contribuyen a la disminución de la expresión de eNOS. 487 P. GÓMEZ-FERNÁNDEZ y cols. En resumen, nuestros hallazgos sugieren que en la disminución de la biodisponibilidad de ON que se ha descrito en la HTA interviene, además de un aumento de la degradación de ON por ROS, un posible descenso de su síntesis secundario a una menor expresión de la eNOS. BIBLIOGRAFÍA 1. Moncada S, Higs A: The L-arginine-nitric oxide pathway. 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